色譜法(Chromatography,把混合物分離成單組分的方法)又稱色層法、層析法、層離法等,系指把混合物分離成為單組分的一種分離分析方法。是一種重要的分離分析技術(shù)和物化研究方法,由于具有分離效能好、分析速度快、檢測靈敏度高、適用范圍廣和操作簡便等特點(diǎn),因此在生產(chǎn)、科研、教學(xué)等的眾多領(lǐng)域中得到了廣泛應(yīng)用,特別是與計(jì)算機(jī)系統(tǒng)聯(lián)用以來,它已成為分析測試和分離提純*的手段。
色譜法的分離原理是利用混合物中各組分在流動相和固定相中具有不同的溶解-解析能力、吸附-脫附能力,或其他親和作用力的差異,當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時,樣品各組分在兩相中反復(fù)多次(≥103次)受到上述各種作用力的作用,從而使混合物各組分獲得互相分離。
當(dāng)樣品(例如含A、B兩組分的混合物)進(jìn)入色譜柱頭以后,流動相把樣品帶入色譜柱內(nèi),剛進(jìn)入柱子時,組分A和B以混合譜帶出現(xiàn)。
由于各組分在固定相中的溶解-解析、或吸附-脫附、或其他親和作用力的差異,各組分在色譜柱中的滯留時間也就不同,即它們在柱中的運(yùn)行速度不同。隨著流動相的不斷流過,組分在柱中兩相間經(jīng)過了反復(fù)多次的分配和平衡過程,當(dāng)運(yùn)行一定的柱長以后,樣品中各組分得到了分離。當(dāng)組分A離開色譜柱出口流過檢測器時,記錄設(shè)備就記錄出組分A的色譜峰;繼之當(dāng)組分B離開色譜柱流過檢測器時,記錄設(shè)備就記錄出組分B的色譜峰。
由于色譜柱中存在著渦流擴(kuò)散、分子擴(kuò)散(縱向擴(kuò)散)、傳質(zhì)阻力以及其他因素的作用,使得所記錄的色譜峰并不是以一條矩形的譜帶出現(xiàn),而是一條接近高斯分布曲線的色譜峰。
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